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| 實驗離心機(jī)轉(zhuǎn)速和離心時間的確定 |
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實驗離心機(jī)分離的效果除了與離心機(jī)種類、離心方法、離心介質(zhì)及密度梯度等因素有關(guān)以外，實際操作時，主離心機(jī)轉(zhuǎn)速和離心時間的確定、離心介質(zhì)的PH值和溫度等條件也至關(guān)重要。
(一)實驗室離心機(jī)的轉(zhuǎn)速
離心加速度的大小取決于轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)速和顆粒的旋轉(zhuǎn)半徑。在說明離心條件時，往往也用相對離心力場來表示。實際工作中，離心力場的數(shù)據(jù)是指其平均值。即是指在離心溶液中點處顆粒所受的離心力場。
(二)離心時間
離心時間依據(jù)離心方法的不同而有所差別。對于差速離心來說，是指某種顆粒完全沉降到離心管底的時間；對等密度梯度離心而言，離心時間是指顆粒完全到達(dá)等密度點的平衡時間；而密度梯度離心所需的時間則是指形成界限分明的區(qū)帶的時間。對于密度梯度離心和等密度梯度離心所需的區(qū)帶形成時間或平衡時間，影響因素很復(fù)雜，可通過試驗后確定。
顆粒的沉降時間又稱澄清時間，是指顆粒從離心樣品液液面完全沉降到離心管底所需的時間。沉降時間決定于顆粒沉降速度和沉降距離。
(三)溫度和PH值
為了防止分離物質(zhì)的凝集、變性和失活，除了在離心介質(zhì)的選擇方面加以注意外，還必須控制好溫度及介質(zhì)溶液的PH值等離心條件。離心溫度一般控制在4度左右，對于某些熱穩(wěn)定性較好的酶等，離心也可在室溫下進(jìn)行。但在超速或高速離心時，轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)會發(fā)熱從而引起溫度升高。故必須采用冷凍系統(tǒng)，使溫度保持在一定范圍內(nèi)。
離心介質(zhì)溶液的PH值應(yīng)該是處于酶穩(wěn)定的PH范圍內(nèi)，必要時可采用緩沖液。另外，過酸或過堿還可能引起轉(zhuǎn)子和離心機(jī)的其他部件的腐蝕，應(yīng)盡量避免。 |
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